Wykrywanie mutacji w EGFR w krążących komórkach raka płuc czesc 4

Testowaliśmy przydatność specyficznego dla alleli testu SARMS23 do wykrywania mutacji EGFR w populacjach rzadkich komórek. Ten test jest przeznaczony do wykrywania wielu typów mutacji EGFR związanych z wrażliwością na lek, w tym delecji z eksonu 19 w ramce (łącznie analizowanych jako mutacje Del ) i mutacją lasemi L858R, które razem obejmują 90% mutacji EGFR. Test wykrywa również mutację T790M związaną z opornością na inhibitory kinazy tyrozynowej. 16-18 W celu potwierdzenia wyników testu SARMS, najpierw przeanalizowaliśmy 26 guzów zatopionych w parafinie niedrobnokomórkowych raków płuca uprzednio zidentyfikowanych jako mających mutację EGFR i 8 próbek zgłoszono jako mających allele typu dzikiego przez sekwencjonowanie (Tabela 2). W teście SARMS i sekwencjonowaniu zidentyfikowano tę samą mutację w 25 próbach nowotworu, podczas gdy wszystkie 8 guzów typu dzikiego zostało potwierdzonych jako negatywne, dając czułość 96% i swoistość 100%. Pojedyncza rozbieżność wynikała z rzadkiej mutacji delecyjnej, która nie mieściła się w zakresie zdolności wykrywania w teście SARMS. Rysunek 1. Ryc. 1. Korelacja pomiędzy obecnością mutacji T790M w próbkach z biopsją guza a zmniejszeniem przeżycia bez progresji. U pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuca z mutacjami EGFR, którzy otrzymywali terapię gefitynibem lub erlotynibem, obecność mutacji oporności na lek T790M przed rozpoczęciem leczenia była związana ze zmniejszeniem przeżycia wolnego od progresji.
Korzystając z testu SARMS, byliśmy w stanie zidentyfikować rzadkie zmutowane allele EGFR poniżej granicy wykrywalności standardowego sekwencjonowania. Oprócz znanej pierwotnej mutacji EGFR, wykryto niskie poziomy T790M w próbkach guza przed leczeniem od 10 z 26 pacjentów (38%). Stosunkowo wysoka liczba cykli amplifikacji, które były wymagane do wykrycia T790M sugeruje, że mutacja jest obecna tylko w niewielkiej liczbie komórek. Rzeczywiście, sekwencjonowanie klonowanych produktów reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) z jednego z tych nowotworów zidentyfikowało tylko jedną mutację T790M w 500 allelach EGFR. Obecność mutacji lekooporności na tak niskiej częstotliwości nie wykluczała znaczących odpowiedzi na leczenie inhibitorami kinazy tyrozynowej wśród pacjentów z guzami zmutowanymi EGFR, ale wiązała się z uderzającą różnicą w przeżywalności bez progresji, z medianą 7,7 miesiące u pacjentów z wykrywalnym allelem T790M w porównaniu z 16,5 miesiąca u pacjentów bez wykrywalnego allelu (współczynnik ryzyka dla progresji dla allelu T790M, 11,5, 95% przedział ufności, 2,94 do 45,1, P <0,001) (Figura 1). Wydaje się prawdopodobne, że terapia inhibitorami kinazy tyrozynowej spowoduje wybór istniejącego wcześniej allelu odporności na T790M. Oczekuje się, że taka selekcja przyczyni się do zmiany czasu trwania odpowiedzi na leczenie inhibitorami kinazy tyrozynowej u pacjentów z uczulającymi mutacjami EGFR.
Wykrywanie mutacji EGFR w krążących komórkach nowotworowych
Tabela 3. Tabela 3. Analiza mutacji EGFR w krążących komórkach nowotworowych i wolnym DNA plazmy oraz zgodność z mutacją nowotworową. Po ustaleniu wiarygodności testu SARMS, zastosowaliśmy go do analizy krążących komórek nowotworowych izolowanych z krwi obwodowej
[hasła pokrewne: dentysta poznań, jula gazetka, aparaty ortodontyczne Clear Aligner ]

Powiązane tematy z artykułem: aparaty ortodontyczne Clear Aligner dentysta poznań jula gazetka