Wykrywanie mutacji w EGFR w krążących komórkach raka płuc ad 6

27 nukleotydów, które zostały usunięte w guzie (czarna ramka) są obecne w DNA w CTC (czerwone pole), podczas gdy delecja 15-nukleotydowa w DNA w CTC (czarna ramka) jest obecna w DNA guza (czerwone pole ). Śledzenie CTC reprezentuje bezpośrednie sekwencjonowanie nukleotydów DNA zlizowanego z komórek wychwyconych na chipie CTC, co wskazuje na wysoki stopień wychwyconej czystości komórek nowotworowych. Wrażliwy test SARMS zidentyfikował także rzadkie wtórne mutacje aktywujące EGFR w podgrupie próbek guza, krążących komórek nowotworowych i osocza (tabela 2 i tabela 3 i figura 2A i figura 3 i tabela w dodatkowym dodatku). Aby ocenić znaczenie tych mutacji, monitorowaliśmy genotypy krążących komórek nowotworowych i ilość w czasie w podgrupie pacjentów.
Pomiary seryjne
Szczegółowe analizy seryjne dotyczące ilości i genotypu krążących komórek nowotworowych były dostępne dla czterech pacjentów z mutacjami EGFR po rozpoczęciu leczenia gefitynibem (Figura 2A). U wszystkich czterech pacjentów leczenie gefitinibem wiązało się z głębokim spadkiem liczby krążących komórek nowotworowych. Przerwa między analizami próbek krwi była podyktowana wcześniej zaplanowanymi wizytami klinicznymi, a zatem nie byliśmy w stanie ustalić dokładnego czasu w spadku liczby krążących komórek nowotworowych. Jednak w jednym przypadku (Pacjent 9), 50% spadek liczby krążących komórek nowotworowych był widoczny w ciągu tygodnia po rozpoczęciu leczenia, a najniższy poziom wynosił 3 miesiące. Progresja kliniczna była związana ze wzrostem liczby krążących komórek nowotworowych, aw jednym przypadku (Pacjent 1), drugi spadek był widoczny, gdy guz reagował na kolejną chemioterapię. W przeciwieństwie do braku związku między wartościami bezwzględnymi dla obciążenia nowotworem a ilością krążących komórek nowotworowych, mierzonych u różnych pacjentów w momencie włączenia do badania, zaobserwowano ścisłą zgodność między radiograficzną oceną objętości guza a względną liczbą krążące komórki nowotworowe u pacjentów, którzy byli kolejno leczeni podczas leczenia.
Genotypy krążących komórek nowotworowych ewoluowały podczas leczenia, ze stałą obecnością pierwotnej mutacji aktywującej EGFR i pojawieniem się mutacji oporności na lek T790M. T790M był obecny przy bardzo niskiej częstości alleli w początkowych próbkach nowotworu, jak określono przez względną liczbę cykli wymaganych do amplifikacji, a seryjne analizy wskazywały na zwiększone występowanie allelu odporności w krążących komórkach nowotworowych w czasie, co było zgodne z nabycie klinicznej lekooporności. Co godne uwagi, siedmiu pacjentów wykazało pojawienie się dodatkowych mutacji aktywujących EGFR (Tabela 3 i Figura 2A i Figura 3 i Tabela w Dodatku Uzupełniającym). Chociaż te wtórne zmutowane allele były zazwyczaj mniej powszechne niż pierwotna mutacja, w co najmniej jednym przypadku (Pacjent 2) było wyraźne wykazanie potencjału ewolucji dominującego genotypu u pacjenta (Figura 3). W tym przypadku wyizolowano wystarczającą ilość DNA z wychwyconych krążących komórek nowotworowych, aby umożliwić bezpośrednie sekwencjonowanie EGFR, co potwierdziło, że dominująca mutacja w krążących komórkach nowotworowych różniła się od tej w pierwotnej próbce nowotworu.
Dyskusja
Pokazaliśmy, że mikroukład CTC odtwarza izolowane krążące komórki nowotworowe w wystarczającej ilości iz wystarczającą czystością, aby umożliwić analizy molekularne
[przypisy: długi weekend czerwcowy, naklejka na legitymację, dentysta Lublin ]

Powiązane tematy z artykułem: dentysta Lublin długi weekend czerwcowy naklejka na legitymację